Получение и изучение физико-химических свойств и биологической активности стабилизированных арабиногалактаном наночастиц серебра в отношении кресс-салата
УДК ________________
Гудкова О.И.1, Бобкова Н.В.1, Фельдман Н.Б.1, Луферов А.Н.1, Орехов С.Н.1, Громовых Т.И.1, Самылина И.А.1, Ананян М.А.2, Луценко С.В.1
1 Первый московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации (Сеченовский Университет), г. Москва, Россия
2 Закрытое акционерное общество «Концерн «Наноиндустрия», Москва, Россия ???????
Получение и изучение физико-химических свойств и биологической активности стабилизированных арабиногалактаном наночастиц серебра в отношении кресс-салата Lepidium sativum и фитопатогенного микромицета Fusarium sambucinum
Методом восстановления из нитрата серебра в щелочной среде в присутствии арабиногалактана и диоктилсульфосукцината осуществлен синтез золя, содержащего наночастицы металлического серебра. Средний диаметр наночастиц составлял 11,40±3,96 нм; дзета-потенциал –24 мВ.
Исследование биологической активности наночастиц серебра проводили с использованием в качестве тест-организма кресс-салата Lepidium sativum L. Curled. Продемонстрировано, что инкубация семян в золях с концентрацией серебра 2,34 и 4,69 мкг/мл оказывает стимулирующее действие на энергию прорастания и всхожесть семян кресс-салата Lepidium sativum. Также инкубация семян кресс-салата в золях с концентрацией серебра от 1,17 до 4,69 мкг/мл оказывает значительное стимулирующее действие на рост корня проростков, при некотором замедлении роста гипокотиля. Микроскопическое изучение срезов всасывающей зоны корня проростков показало, что золи серебра оказывают существенное влияние на формирование проводящей системы центрального осевого цилиндра. Количество сосудов ксилемы в проростках, обработанных золем серебра в стимулирующей концентрации 4,69 мкг/мл, значительно больше в сравнении с контролем. При применении для обработки семян золей с концентрацией серебра, превышающей 4,69 мкг/мл, могут проявляться их токсические эффекты, вызывающие подавление роста растений.
Проведено исследование антифунгальной активности золей серебра методом диффузии в агар. Показано, что золи серебра оказывали угнетающее действие на рост фитопатогенного микромицета Fusarium sambucinum. Диаметр зоны угнетения роста F. sambucinum при максимальной концентрации золя 300 мкг/мл составлял 35,3±3,0 мм, а при концентрации 150 мкг/мл – 30,4±3,2 мм, что указывает на довольно высокую чувствительность гриба к наночастицам серебра. Минимальная ингибирующая концентрация, которая угнетала видимый рост тест-штамма F. sambucinum, составляла 18,75 мкг/мл (зона угнетения роста - 12,3±0,9 мм).
Представленные данные свидетельствуют о возможности применения золей, включающих стабилизированные наночастицы серебра для стимуляции энергии прорастания, всхожести, роста и защиты растений от плесневых грибов.
Ключевые слова: наночастицы серебра, рост растений, антифунгальная активность, Lepidium sativum, Fusarium sambucinum
Введение
Вследствие доступности и широких возможностей практического применения наночастицы серебра активно исследуются [1,2]. Были получены наночастицы серебра различного назначения – для медицины [2–4], транспорта биологически активных веществ [5], очистки воды [6], пищевой индустрии [7] и сельского хозяйства [8]. Одним из наиболее широко применяемых методов синтеза наночастиц серебра является восстановление солей серебра боргидридом (тетрагидроборатом) натрия [9,10]. Это объясняется относительно высокой реакционной способностью боргидрида натрия, который, тем не менее, отличается довольно высокой токсичностью. В качестве восстанавливающих агентов также применяют и другие токсичные вещества: N,N-диметилформамид [11], 2-меркаптобензотиазол [12], додецилсульфат натрия [13], гидроксид натрия [14] и др. Очевидно, что более предпочтительным подходом к синтезу наночастиц является применение экологически безопасных и малотоксичных для организма человека восстановителей и стабилизаторов, таких как лимонная кислота [15], различные полимеры [16-18], а также содержащийся в древесине лиственницы сибирской (Larix sibirica) и портулаке огородном (Portulaca oleracea) водорастворимый полисахарид арабиногалактан [19, 20]. Благодаря водорастворимости, термостабильности, биосовместимости, возможности использования как в качестве восстановителя, так и стабилизатора при синтезе наночастиц металлов, арабиногалактан является перспективным биополимером для разработки различных наноструктур и нанокомпозитов биомедицинского назначения [21, 22]. Помимо применения арабиногалактана и других биополимеров, перспективными путями безопасного и эффективного синтеза наночастиц серебра является их восстановление из нитрата серебра с помощью мицелия грибов [23-24], различных бактерий [25-28] и экстрактов растений [29, 30]. Несмотря на привлекательность зеленого синтеза для получения наночастиц серебра, применение арабиногалактана и других биополимеров представляется более предпочтительным, поскольку наряду с биобезопасностью позволяет получать наночастицы в более контролируемых условиях синтеза и с более предсказуемыми свойствами. Объяснением этому может служить применение в подобного рода синтезах биополимеров с установленной структурой и определенной длиной молекулярных цепей. Полученные с помощью различных методов синтеза наночастицы серебра активно исследуются, однако наиболее полно изучены их антимикробные свойства [3, 31]. Помимо применения в качестве антимикробного средства, наночастицы серебра могут найти применение в медицине в качестве средств заживления ран и ожогов в составе кремов, мазей и раневых повязок [32]. В ряде работ была продемонстрирована и противоопухолевая активность наночастиц серебра [33]. Исследуется также потенциал наночастиц серебра в качестве средства стимуляции роста и защиты растений [34-36], однако детальный механизм их действия пока до конца не установлен [37]. Продемонстрировано, что наночастицы серебра, особенно при высоких концентрациях, могут проникать в ткани растений и накапливаться в них [35, 38-40]. При этом наночастицы серебра дозозависимым образом могут оказывать как стимулирующее, так и ингибирующее действие на рост растений, однако для всесторонней оценки возможностей практического использования наночастиц, а также изучения их эффектов на растения требуются дополнительные исследования [41]. Перспективным направлением применения наночастиц серебра является их использование для обеспечения защиты культурных растений от фитопатогенных грибов, которые существенно снижают продуктивность растений и заражают опасными микотоксинами корма для животныхи и сельскохозяйственную продовольственную продукцию. В настоящее время описаны фунгицидные свойства наночастиц серебра в отношении фитопатогенных грибов, таких как Rhizoctonia solani и Fusarium semitectum [42-44], однако потенциал антифунгальной активности наночастиц серебра раскрыт далеко не полностью. В данной работе нами были получены и охарактеризованы наночастицы серебра, стабилизированные биополимером арабиногалактаном и диоктилсульфосукцинатом. Изучено антифунгальное действие полученных наночастиц на фитопатогенный токсинообразующий микромицет Fusarium sambucinum. Также исследовано действие наночастиц серебра на энергию прорастания, всхожесть семян и рост кресс-салата сорта «Курлед» (Lepidium sativum L. Curled), который был использован в качестве тест-организма.
Материалы и методики исследований
Для синтеза наночастиц серебра использовали нитрат серебра, гидроксид аммония (27%), диоктилсульфосукцинат натрия (Aerosol-OT, или бис (2-этилгексил) сульфосукцинат, натриевая соль) (Labtex, Russia), арабиногалактан (Fluka). Синтез проводили методом восстановления из нитрата серебра в щелочной среде в присутствии арабиногалактана. К 0,2% раствору арабиногалактана, нагретому до 90°С, при интенсивном перемешивании добавляли раствор нитрата серебра. Реакцию восстановления серебра проводили в течение 40 мин при той же температуре и рН≥10,0 с последующим добавлением диоктилсульфосукцината натрия и постепенным охлаждением раствора до комнатной температуры.
Определение электрокинетического потенциала наночастиц серебра проводили на анализаторе Photocor compact Z (Россия). Исследования методами просвечивающей электронной микроскопии проводили с помощью микроскопа LEO 912 AB (Carl Zeiss, Германия) при ускоряющем напряжении 100 кВ. Для приготовления образцов каплю золя наносили на медные сетки диаметром 3.05 мм, покрытые тонкой полимерной пленкой-подложкой, и высушивали при комнатной температуре. Распределение наночастиц серебра по размерам определяли путем обработки полученных микрофотографий при помощи программы анализа оптических изображений UTHSCSA Image Tool 3.00.
Оценку влияния наночастиц серебра на растения проводили с использованием в качестве тест-организма кресс-салата сорта «Курлед» (Lepidium sativum L. Curled). Исследования проводили в лабораторных условиях. Оценку влияния наночастиц серебра на энергию прорастания и всхожесть семян, рост гипокотиля и корня проростков проводили на чашках Петри с использованием в каждом варианте эксперимента 3 опытных групп (по 100 семян в каждой). Семена инкубировали в течение 1 ч в золях наночастиц с различными концентрациями серебра – 1,17 2,34; 4,69; 9,38, 18,75; 37,50; 75,00; 150,00 мкг/мл; контрольные группы семян инкубировали в воде. После завершения инкубации семена проращивали в чашках Петри на влажном ложе из фильтровальной бумаги в темноте при 20°С. На 3 сут определяли энергию прорастания семян, на 5 сут - всхожесть, а на 7 сут измеряли длину гипокотиля и главного корня проростков.
Исследование влияния наночастиц серебра на морфологию клеток кресс-салата Lepidum sativum проводили с помощью микроскопического анализа срезов корня семидневных проростков, обработанных золями со стимулирующей и ингибирующей концентрациями серебра: 4,69 мкг/мл и 18,75 мкг/мл соответственно. В качестве контроля использовали проростки не обработанные золем серебра. Предварительно готовили микропрепараты нефиксированных поперечных срезов толщиной 100-150 мкм, которые производили в зоне проведения корней проростков. Срезы помещали во включающую жидкость вода-глицерин (1:1) и изучали под световым микроскопом ЛОМО МИКМЕД–6 (Россия) при увеличении 100х и 400х.
Оценку антифунгальной активности золей серебра проводили методом диффузии в агар (метод лунок). В качестве тест-культуры для определения антифунгальной активности золей серебра, использовали микромицет F. sambucinum коллекции ПМГМУ им. И.М. Сеченова (ВКПМ F-900). Для культивирования тест-штамма использовали агаризованную среду Сабуро. Чашку с посевом помещали в термостат и инкубировали в течение 60 мин при температуре 27°С. Затем, при помощи стерильного сверла (пробойника) в чашках Петри с посевом делали лунки диаметром 10 мм и вносили по 400 мкл золей серебра в различных концентрациях 9,38; 18,70; 37,50; 75,00; 150,00; 300,00 мкг/мл. В качестве контроля в лунку вносили стерильную воду в объеме 400 мкл. Чашки с тест-штаммом Fusarium sambucinum инкубировали в течении 5 сут при температуре 27°С, а затем просматривали на наличие вокруг лунок зон ингибирования.
Статистическую обработку результатов осуществляли в программе Microcal Origin 6.0. Для выявления статистической значимости отличий использовали критерий Стьюдента; данные считали достоверными при значениях р<0,05.
Результаты исследования и обсуждение
Золь серебра был получен восстановлением нитрата серебра с помощью арабиногалактана, который одновременно выступал как в роли восстановителя, так и стабилизатора наночастиц. Для повышения устойчивости золя серебра к полученному препарату добавляли диоктилсульфосукцинат натрия. По данным просвечивающей электронной микроскопии полученный препарат содержал наночастицы серебра сферической формы (рис. 1). Средний диаметр наночастиц составлял 11,40±3,96 нм (рис. 2); дзета-потенциал –24 мВ.
Рис. 1. Изображение наночастиц 2. Гистограмма распределения по размерам
серебра, полученное методом стабилизированных наночастиц серебра.
просвечивающей электронной
микроскопии
Далее проводили исследование влияния золей серебра на энергию прорастания семян кресс-салата Lepidium sativum. Энергию прорастания семян определяли на 3 сут проращивания (рис 3).
Рис 3. Энергия прорастания семян кресс-салата Lepidium sativum, обработанных золями с различными концентрациями серебра. Контрольную группу семян инкубировали в воде. * - p<0,05 относительно контроля.
Как видно на рис. 3 в контрольной группе энергия прорастания семян на 3 сут эксперимента достигала 83.00±0.82%. Между экспериментальными группами в отношении энергии прорастания наблюдались существенные различия. При наиболее низкой концентрации серебра в инкубационной среде (1,17 мкг/мл) стимуляции энергии прорастания семян не происходило (данные статистически не различаются). При инкубации семян в золях с концентрациями серебра 2,34 и 4,69 мкг/мл наблюдался выраженный стимулирующий эффект наночастиц в отношении энергии прорастания семян. При этом при концентрации серебра 4,69 мкг/мл стимулирующий эффект достигал максимального уровня 96.5±1.29% (энергия прорастания семян возрастала по сравнению с контролем на 13,5%). В группах семян, которые инкубировались в золях, содержащих серебро в высоких концентрациях (9,38–150 мкг/мл) проявлялись дозозависимые ингибирующие эффекты (рис. 3). Максимальный ингибирующий эффект достигался при концентрации серебра в золе 150 мкг/мл (после инкубации семена не проросли вовсе).
Таким образом, золи серебра оказывают выраженное дозозависимое влияние на энергию прорастания семян кресс-салата Lepidium sativum, подавляя ее при высоких концентрациях и, напротив, стимулируя при умеренных концентрациях.
Всхожесть семян определяли на пятые сутки проращивания. При инкубации семян кресс-салата Lepidium sativum в золе с наиболее низкой концентрацией серебра (1,17 мкг/мл) заметного влияния на всхожесть не наблюдалось (рис. 4.). При более высоких концентрациях серебра в золях (2,34 и 4,69 мкг/мл) проявлялось стимулирующее действие наночастиц, и всхожесть семян возрастала по сравнению с контролем на 8,8% и 11,7% соответственно. Всхожесть в группе семян, инкубировавшихся в золе с концентрацией серебра 9,38 мкг/мл, была сопоставима с контролем. При еще более высоких концентрациях серебра в инкубационной среде всхожесть семян последовательно снижалась и была существенно ниже, чем в контроле.
Таким образом, при высоких концентрациях серебра в золях наночастицы оказывают дозозависимое ингибирующее действие как на энергию прорастания, так и на всхожесть семян кресс-салата Lepidium sativum. В то же время, инкубация семян в золях с умеренными концентрациями серебра (2,34 и 4,69 мкг/мл) позволяет существенно повысить энергию прорастания и всхожесть посевного материала, что может быть обусловлено стимулирующим действием наночастиц на прорастание семян, а также фунгицидным действием на фитопатогенные грибы.
Рис. 4. Всхожесть семян кресс-салата Lepidium sativum на пятые сутки проращивания. * - p<0,05 относительно контроля.
Для определения влияния наночастиц на развитие проростков после инкубации семян кресс-салата Lepidium sativum в золях с различными концентрациями серебра и последующего проращивания, на 7 сут измеряли длину главного корня и гипокотиля проростков (рис.5, 6).
Рис. 5. Длина главного корня и гипокотиля проростков кресс-салата Lepidium sativum на 7 сут проращивания. Перед проращиванием семена инкубировали в золях наночастиц с различными концентрациями серебра. * - p<0,05 относительно контроля.
При инкубации семян в золях с концентрациями серебра 1,17; 2,34 и 4,69 мкг/мл и последующего проращивания в каждой из исследуемых групп наблюдалось некоторое замедление развития гипокотиля при существенной дозозависимой стимуляции роста корня – длина корня у опытных образцов значительно превышала длину корня в контроле (на 34.4, 46.4 и 79,1% соответственно). После предварительной инкубации семян в золе с концентрацией серебра 9.38 мкг/мл длина гипокотиля была существенно меньше, чем в контроле (на 58,7%), а длина корня в опыте на 71,3% превышала длину корня в контроле, что свидетельствует о значительном стимулирующем действии наночастиц серебра на рост корня, при подавлении роста гипокотиля. Как видно на рис. 5, при инкубации семян в золях с еще более высокими концентрациями серебра (18.75; 37.50 и 75.00 мкг/мл) наблюдается последовательно нарастающее ингибирующее действие золей как в отношении гипокотиля, так и корня.
Таким образом, инкубация семян в золях с концентрацией серебра 2,34 и 4,69 мкг/мл оказывает стимулирующее действие на энергию прорастания и всхожесть семян кресс-салата Lepidium sativum. Также инкубация семян кресс-салата в золях с концентрацией серебра (от 1.17 до 4.69 мкг/мл) оказывает значительное стимулирующее действие на рост корня проростков при некотором замедлении роста гипокотиля. При применении для обработки семян золей с концентрацией серебра, превышающей 4,69 мкг/мл, могут проявляться их токсические эффекты, вызывающие подавление роста растений.
Представленные данные свидетельствуют о возможности применения золей, включающих стабилизированные наночастицы серебра, для стимуляции энергии прорастания, всхожести, а также роста растений.
Рис. 6. Проростки кресс-салата Lepidium sativum после 7 сут проращивания семян, необработанных (а) и обработанных золями с концентрациями серебра 18,75 мкг/мл(б), 9,38 мкг/мл(в), 4,69 мкг/мл(г); 2,34 мкг/мл (д); 1,17 мкг/мл (е).
Как видно на рис. 7, при микроскопическом изучении срезов всасывающей зоны корня проростков кресс-салата, не обработанных (контроль) и обработанных золями серебра, у всех объектов исследования наблюдалась характерная анатомическая картина корней первичного строения. В корне различаются покровная ткань – однослойная эпиблема, первичная кора, состоящая из 3-4 слоев мезодермы и одного внутреннего слоя эндодермы, а также центральный осевой цилиндр диархного строения. Клетки паренхимы мезодермы кругловато-овальной формы с более или менее выраженными межклетниками прямоугольной формы. При сравнительном изучении анатомического строения контрольного и опытных образцов было установлено, что действие золя с концентрацией серебра 4,69 мкг/мл (стимулирующая концентрация) проявлялось в формировании клеток паренхимы многоугольной формы, уменьшении их размера, а также уменьшении размера межклетников паренхимы первичной коры, которые практически отсутствуют у образцов, обработанных золем в ингибирующей концентрации (18,75 мкг/мл). Золь в ингибирующей концентрациии серебра оказывал также влияние на клетки эпиблемы и периферические слои клеток мезодермы, выражающееся в утолщении клеточных стенок и уменьшении размера паренхимных клеток. Золи серебра оказывали также существенное влияние на формирование проводящей системы центрального осевого цилиндра. Количество сосудов ксилемы в проростках обработанных золем в стимулирующей концентрации серебра, значительно больше в сравнении с контролем и золем в ингибирующей концентрации.
Рис. 7. Микрофотографии поперечных срезов проростков кресс-салата Lepidium sativum необработанных (А) и обработанных золями с концентрацией серебра 4,69 мкг/мл (Б) и 18,75 мкг/мл (В).
На основании результатов исследований по влиянию наночастиц серебра на морфологическое и анатомическое строение проростков кресс-салата можно сделать вывод о том, что действие золя серебра в стимулирующей концентрации приводило к формированию многочисленных проводящих элементов корня, что обусловливает более интенсивный рост корневой системы и всего растения в целом. Действие ингибирующей концентрации золя, напротив, приводит к подавлению роста корневой системы и замедлению развития растения.
Грибы рода Fusarium являются одними из самых опасных плесневых фитопатогенных грибов, продуцирующих опасные для здоровья человека микотоксины [45, 46]. Поскольку источниками микотоксинов могут быть поражённые фитопатогенными грибами зеленые растения, корма для животных, а также пищевые продукты, важной задачей является поиск новых и расширение арсенала уже имеющихся эффективных средств борьбы с плесневыми грибами. В связи с этим представляло интерес изучение антифунгального действия золей стабилизированных наночастиц металлического серебра на фитопатогенный гриб F. sambucinum.
Как видно на рис 8, золи серебра оказывают угнетающее действие на рост гриба Fusarium. sambucinum. Диаметр зоны угнетения роста F. sambucinum при максимальной концентрации золя 300 мкг/мл составлял 35,3±3,0 мм, а при концентрации 150,00 мкг/мл – 30,4±3,2 мм, что указывает на довольно высокую чувствительность гриба к наночастицам серебра. При действии золей в концентрациях 75,00 и 37,50 мкг/мл их активность заметно снижалась и зоны подавления составляли 23,4±3,9 и 14,7±0,9 мм соответственно. Минимальная ингибирующая концентрация, которая угнетает видимый рост тест-штамма F. sambucinum, составляет 18,75 мкг/мл (зона угнетения роста - 12,3±0,9 мм). Проявление антифунгальной активности в отношении фитопатогенных грибов позволяет рассматривать золи стабилизированных наночастиц серебра в качестве потенциального средства, применение которого может способствовать повышению урожайности и защите растений и сельскохозяйственной продукции от плесневых грибов и опасных для здоровья человека микотоксинов.
Рис. 8. Зоны угнетения роста гриба F. sambucinum при действии золей с концентрациями серебра 9,38; 18,7; 37,5; 75; 150; 300 мкг/мл.
Заключение
Получен золь, содержащий биологически активные, стабилизированные арабиногалактаном и диоктилсульфосукцинатом, наночастицы серебра сферической формы диаметром 11,40±3,96 нм. Золь серебра в умеренных концентрациях проявлял выраженный стимулирующий эффект в отношении энергии прорастания, всхожести семян, а также роста кресс-салата сорта «Курлед» (Lepidium sativum L. Curled). Действие золя серебра в умеренной, стимулирующей концентрации приводит к формированию многочисленных проводящих элементов корня, что, вероятно, вызывает активизацию роста корневой системы и всего растения в целом. Действие золей с высоким содержанием наночастиц серебра, напротив, приводит к подавлению роста корневой системы и замедлению развития растения. Важным продемонстрированным биологическим эффектом золя серебра является также способность к подавлению роста фитопатогенного, токсинообразующего гриба F. sambucinum. Таким образом, стабилизированные золи серебра имеют значительный потенциал для применения в области стимуляции роста и защиты культурных растений от фитопатогенов. Для более полного и детального определения возможностей применения стабилизированных золей серебра в области сельского хозяйства, медицины и других отраслях экономики, требуются дополнительные исследования.
Литература
1. X. Chen, H.J. Schluesener, Nanosilver: a nanoproduct in medical application, Toxicol. Lett. 176 (2008) 1–12.
2. K. Chaloupka, Y. Malam, A.M. Seifalian, Nanosilver as a new generation of nanoproduct in biomedical applications, Trends Biotechnol. 11 (2010) 580–588.
3. M. Rai, A. Yadav, A. Gade, Silver nanoparticles as a new generation of antimicrobials, Biotechnol. Adv. 27 (2009) 76–83.
4. Y.A. Krutyakov, A.A. Kudrinskiy, A.Y. Olenin, G.V. Lisichkin, Russ, Synthesis and properties of silver nanoparticles advances and prospects, Chem. Rev. 77 (2008) 233–235.
5. T.W. Prow, J.E. Grice, L.L. Lin, R. Faye, M. Butler, W. Becker, E.M.T. Wurm, C. Yoong, T.A. Robertson, H.P. Soyer, M.S. Roberts, Nanoparticles and microparticles for skin drug delivery, Adv. Drug Deliv. Rev. 63 (2011) 470–491. .
6. T. Dankovich, D. Gray, Bactericidal paper impregnated with silver nanoparticles for point-of-use water treatment, Environ. Sci. Technol. 45 (2011) 1992–1998.
7. Q. Chaudhry, L. Castle, Food applications of nanotechnologies: an overview of opportunities and challenges for developing countries, Trends Food Sci.Technol. 22 (2011) 595–603.
8. R. Nair, S.H. Varghese, B.G. Nair, T. Maekawa, Y. Yoshida, D. Sakthi Kumar, Nanoparticulate material delivery to plants, Plant Sci. 179 (2010) 154–163. 15 (2003) 2017–2024.
9. M.R.D. Moura, L.H.C. Mattoso, V. Zucolotto, Development of cellulose based bactericidal nanocomposites containing silver nanoparticles and their use as active food packaging, J. Food Eng. 109 (2012) 520–524.
10. D.D.Evanoff Jr., G.Chumanov. Synthesis and Optical Properties of Silver Nanoparticles and Arrays // ChemPhysChem, 6, 1221 (2005).
11. Y. Gauri, C. Thieuleux, A. Mehadi, C. Reye, R.J.P. Corriu, Gomez-Gallardo, In situ formation of gold nanoparticles within thiol functionalized HMS-C16 and SBA-15 type materials via an organometallic two-step approach, Chem. Mater. 15 (2003) 2017–2024.
12. R.M. Stiger, S. Gorer, B. Craft, P.M. Penner, Investigations of electrochemical silver nanocrystal growth on hydrogen-terminated silicon, Langmuir 15 (3) (1999) 790–798.
13. A.J. Kora, J. Arunachalam, Assessment of antibacterial activity of silver nanoparticles on Pseudomonas aeruginosa and its mechanism of action, World J. Microbiol. Biotechnol. 27 (2011) 1209–1216.
14. K.P. Bankuraa, D. Maitya, M.M. Mollick, D. Mondal, B. Bhowmick, M.K. Bain, A. Chakraborty, J. Sarkar, K. Acharya, D. Chattopadhyay, Synthesis, characterization and antimicrobial activity of dextran stabilized silver nanoparticles in aqueous medium, Carbohydr. Polym. 89 (2012) 1159–1165.
15. L. Rivas, S. Sanchez-cartos, J.V. Garcia-Ramos, G. Marcillo, Growth of silver colloidal particles obtained by citrate reduction to increase the Raman enhancement factor, Langmuir 17 (2001) 574–577.
16. D. Maity, M.K. Bain, B. Bhowmick, J. Sarkar, S. Saha, K. Acharya, In situ synthesis, characterization, and antimicrobial activity of silver nanoparticles using water soluble polymer, J. Appl. Polym. Sci. 122 (2011) 2189–2196., растительные экстракты
17. J. Huang, Q. Li, D. Sun, Y. Lu, Y. Su, X. Yang, H. Wang, Y. Wang, W. Shao, N. He, J. Hong, C. Chen, Biosynthesis of silver and gold nanoparticles by novel sundried Cinnamomum camphora leaf, Nanotechnology 18 (2007) 105104–105114.
18. I. Lukman, B. Gong, C.E. Marjo, U. Roessner, A.T. Harris, Facile synthesis, stabilization, and anti-bacterial performance of discrete Ag nanoparticles using Medicago sativa seed exudates, J. Colloid Interface Sci. 353 (2011) 433–444.
19. Grishchenko, L.A., Medvedeva, S.A., Aleksandrova, G.P., Feoktistova, L.P., Sapozhnikov, A.N., Sukhov, B.G., Trofimov, B.A. Redox reactions of arabinogalactan with silver ions and formation of nanocomposites (2006) Russian Journal of General Chemistry, 76 (7), pp. 1111-1116. doi: 10.1134/S1070363206070189
20. Anuradha, K., Bangal, P., Madhavendra, S.S. Macromolecular arabinogalactan polysaccharide mediated synthesis of silver nanoparticles, characterization and evaluation (2016) Macromolecular Research, 24 (2), pp. 152-162. doi: 10.1007/s13233-016-4018-4
21. В.А. Александрова, Л.Н. Широкова, В.С. Садыкова, А.Е. Баранчиков. Антимикробная активность наночастиц серебра в матрице кабоксиметилхитина, полученных микроволновым гидротермальным методом // Прикладная биохимия и микробиология. 2018. Т.54. № 5. С.496 - 500
22. Sukhov B. G., Aleksandrova G. P., Grishchenko L. A., Feoktistova L. P. et al. Nanobiocomposites of noble metals on arabinogalactan basis: synthesis and structure // Journ. Structural Chem. — 2007. — Vol. 48, N 5. — P. 922–927.].
23. P. Mukherjee, A. Ahmad, D. Mandal, S. Senapati, S. R. Sainkar, M. I. Khan, R. Ramani, R. Pasricha, P. V. Ajaykumar, M. Alam, M. Sastry, R. Kumar, Bioreduction of AuCl4-Ions by the Fungus, Verticillium sp. and Surface Trapping of the Gold Nanoparticles Formed, Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 40 (2001) 3585-3588.
24. A. Ahmad, P. Mukherjee, S. Senapati, D. Mandal, M.I. Khan, R. Kumar, M. Sastry, Extracellular biosynthesis of silver nanoparticles using the fungus Fusarium oxysporum, Colloids Surf. B: Biointerf. 28 (2003) 313-318],
25. Nair, B.; Pradeep, T. Coalescence of nanoclusters and formation of submicron crystallites assisted by Lactobacillus strains. Cryst. Growth Des. 2002, 2, 293–298. [CrossRef].
26. Kalimuthu, K.; Babu, R.S.; Venkataraman, D.; Bilal, M.; Gurunathan, S. Biosynthesis of silver nanocrystals by Bacillus licheniformis. Colloid Surface B 2008, 65, 150–153. [CrossRef] [PubMed]
27. Gurunathan, S.; Kalishwaralal, K.; Vaidyanathan, R.; Venkataraman, D.; Pandian, S.R.; Muniyandi, J.; Hariharan, N.; Eom, S.H. Biosynthesis, purification and characterization of silver nanoparticles using Escherichia coli. Colloids Surf. B Biointerfaces 2009, 74, 328–335. [CrossRef] [PubMed]
28. Klaus, T.; Joerger, R.; Olsson, E.; Granqvist, C.G. Silver-based crystalline nanoparticles, microbially fabricated. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999, 96, 13611–13614. [CrossRef] [PubMed].
29. Gurunathan, S. Biologically synthesized silver nanoparticles enhances antibiotic activity against Gram-negative bacteria. J. Ind. Eng. Chem. 2015, 29, 217–226. [CrossRef]
30. Gurunathan, S.; Jeong, J.K.; Han, J.W.; Zhang, X.F.; Park, J.H.; Kim, J.H. Multidimensional effects of biologically synthesized silver nanoparticles in Helicobacter pylori, Helicobacter felis, and human lung (L132) and lung carcinoma A549 cells. Nanoscale Res. Lett. 2015, 10, 1–17. [CrossRef] [PubMed].
31. K.H. Cho, J.E. Park, T. Osaka, S.G. Park, The study of antimicrobial activity and preservative effects of nanosilver ingredient, Electrochim. Acta 51 (2005) 956–960.
32. A.B.G. Lansdown, Silver. 2: toxicity in mammals and how its products aid wound repair, J. Wound Care 11 (2002) 173–177.
33. Phytochemicals and Biogenic Metallic Nanoparticles as Anticancer Agents Pasupuleti Visweswara Rao,1 Devi Nallappan,1 KondetiMadhavi,2 Shafiqur Rahman,3 Lim Jun Wei,4 and Siew Hua Gan5. Volume 2016, Article ID 3685671, 15 pages http://dx.doi.org/10.1155/2016/3685671
34. B. Zhang, L.P. Zheng Yi, W. Li, W.J. Wen, Stimulation of artemisinin production in Artemisia annua hairy roots by Ag–SiO2 core–shell nanoparticles, Curr. Nanosci. 9 (2013) 363–370.
35. H.M.H. Salama, Effects of silver nanoparticles in some crop plants, Common bean (Phaseolus vulgaris L.) and corn (Zea mays L.), Int. Res. J. Biotechnol. 3 (2012) 190–197.
36. M. Seifsahandi, A. Sorooshzadeh, H. Rezazadeh, H.A. Naghdiabadi, Effect of nano silver and silver nitrate on seed yield of borage, J. Med. Plants Res. 5 (2011) 171–175.
37. M. Kumari, A. Mukherjee, N. Chandrasekaran, Genotoxicity of silver nanoparticles in Allium cepa, Sci. Total Environ. 407 (2009) 5243–5246.
38. L.Y. Yin, Y.W. Cheng, B. Espinasse, B.P. Colman, M. Auffan, M. Wiesner, J. Rose, J. Liu, E.S. Bernhardt, More than the ions: the effects of silver nanoparticles on Lolium multiflorum, Environ. Sci. Technol. 45 (2011) 2360–2367.
39. H. Jiang, M. Li, F. Chang, W. Li, L. Yin, Physiological analysis of silver nanoparticles and AgNO3 toxicity to Spirodela polyrrhiza, Environ. Toxicol. Chem. 31 (2012) 1880–1886.
40. I.R. Beattiea, R.G. Haverkamp, Silver and gold nanoparticles in plants: sites for the reduction to metal, Metallomics 3 (2011) 628–632.
41. Mirzajani F., Askari H., Hamzelou S., Farzaneh M., Ghassempour A. Effect of silver nanoparticles on Oryza sativa L. and its rhizosphere bacteria. Ecotoxicol. Environ. Saf., 2013, 88: 48-54 (doi: 10.1016/j.ecoenv.2012.10.018).
42. H. Khadri, M. Alzohairy, A. Janardhan, A.P. Kumar, G. Narasimha, Green synthesis of silver nanoparticles with high fungicidal activity from olive seed extract, Adv. Nanoparticles 2 (2013) 241–246.
43. Gajbhiye M, Kesharwani J, Ingle A, Gade A, Rai M. Fungus-mediated synthesis of silver nanoparticles and their activity against pathogenic fungi in combination with fluconazole. Nanomed Nanotechnol Biol Med 2009;5:382–6.
44. Elgorban AM, El-Samawaty AE-RM, Yassin MA, Sayed SR, Adil SF, Elhindi KM, et al. Antifungal silver nanoparticles: synthesis, characterization and biological evaluation. Biotechnol Biotechnol Equip 2016;30:56–62.